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FITC标记套装

FITC标记套装
FITC标记套装

货  号:P1250
名  称:FITC标记套装
规  格:一套
价  格:640

产品型号:

联系方式

86-021-65672052

产品先容

FITC标记套装

组成

规格

保存条件

FITC

10mg

-20

DMSO

10ml

RT

0.2M PH9.5 CB

100ml

2-8

1M NH4Cl

1ml

2-8

Sephadex G-25

100ml(约50%含量)

2-8

层析空柱(10ml)

一套

RT

透析袋MD25(8000-14000)

20CM

2-8

铁夹(夹透析袋)

两支

RT

保存条件FITC -20度保存,其他常温保存。

产品说明:本套装是将FITC标记的常用试剂集合为一体而成。适合于蛋白等含有氨基物质的标记。特别是抗体的标记。

如果待标记物分子量太小(如小于5KD),可能并不适合用此套装(主要是后期纯化去除未标记上的FITC,可选用透析袋)。

标记原理:在高PH下FITC可蛋白等分子的氨基相连,形成共价健。

操作方法:

一,  标记量的计算:FITC分子量为389.4。一般为FITC:待标记物=101左右。比如抗体IgG分子量一般为150160KD。则1mg HRP可标记抗体40mg之间。

二,  计算好各步反应时间。作好开始标记的准备工作。因为标记是在PH为9.5的条件下反应,如果待标记物本身盐含量很低并且缓冲力差,如生理盐水,可等二天再准备。如果不确定,将0.2M PH9.5 CB稀释20倍,作为透析液,将待标记物装入透析袋中4℃透析过ye,透析袋适当留长约1ml体积的量以备第二天加入酶(透析袋用双蒸水清洗三次,祥细使用请见附录)。

三,  如果样品缓冲能力很小(固体可用水溶解),加入1/20体积的0.2M PH9.5 CB,混匀。

四,  准备层析柱(使用方法见附录)。

五,  在样品准备好的情况下,称量2mg左右FITC(请不要一次称量过小,称量过小时,误差会很大),加入1ml DMSO溶解。取适量溶解好的FITC,加入准备好的样品迅速混匀。避光常温反应两小时或者4℃反应过ye。

六,  加入1/20体积的1M NH4Cl,避光4℃反应两小时。

七,  过柱。请保证总溶液体积不超过总体积的1/5。比较理想的是在1/10。也就是10ml凝胶,zui多过柱1ml的标记液(此步也可以改为透析。一般避光透析两天左右,到没有明显黄色出来为止)。

 

附透析袋使用方法:

本透析袋已预处理过,用双蒸水清洗后将水用适当吸一下。就可直接使用。透析袋上下都可以用铁夹,但如果铁夹不够用,下部可用细线或者其他的透析袋夹。

将透析袋轻轻的折上两到三折。用线或者透析袋夹封住,上面支开,加入待透析物,留一定量的空气在顶上,并小心的折一折,用铁夹夹住,轻轻的挤压,如没发现有液体流出,可放入透析液中。一般透析可用纯净水瓶去顶使用。用一次性筷子或者其他合适物穿过铁夹,将透析袋吊在透析液中,补充透析液,使透析液盖过透析袋中的液面而不要淹过铁夹下面。

分子筛柱使用方法:

取空柱,加入双蒸水冲洗三次,找一合适的地方架好,下面收集废液,将Sephadex G-25取出摇匀,轻轻的沿壁倒入柱中(用去尖移液器加入也可以),等液体流出少量时,不停的补加凝胶到一合适的体积。一般加到10ml左右。在上口留出1-2ml空间。灌完胶后,用三倍体积的双蒸水冲洗(从上面加入,下面自动流出),再用合适的缓冲液冲洗三倍体积(如生理盐水或者PBS等)。

当zui后一次加缓冲液后,把柱上层弄平整。等上层溶液完全流完,就可以加入待过柱的标记液。用去尖吸头小心的中空滴加,如果一次加不完,等流出少量后再加,一直加完。待标记物完全流干后,再加入少量约3-5滴缓冲液(如生理盐水或者PBS等),流完再加,如此三次左右,接着就可以一次加入1-2ml缓冲液(如生理盐水或者PBS等)。加到一定体积后,可以看到柱中黄色会分层。收集下层溶液,加入适当的稳定剂等,定溶。备用。

用过的凝胶可以丢弃或者重复使用(如果重复使用,须用大量的缓冲液冲洗,待上层黄色完全流走。折中的方法是小心的将上层黄色胶挖掉。流下层的回收)

产品相关关键字: fitc标记试剂

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