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细胞核提取试剂盒

细胞核提取试剂盒

简要描述:货  号:P0050
名  称:细胞核提取试剂盒
规  格:50T/100T
价  格:320.00/580.00

产品型号:

所属分类:其他自产即用试剂

更新时间:2016-12-15

厂商性质:经销商

详情先容

细胞核提取试剂盒

一,试剂盒组份

组份

 (50T)

 (100T)

Lysis Buffer

100 mL

200 mL

Reagent A

2.5mL

5mL

Medium Buffer

25 ml

50 ml

Store Buffer

5mL

10mL

二,细胞核提取试剂盒说明

用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的细胞核。适合于动物软组织(肝或脑组织)和硬组织(肌肉)以及培养细胞的细胞核的制备。其制备物产量高,可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。产品不含污染性蛋白酶和核酶,性能稳定。

三,操作步骤

1. 样本处理

a. 组织匀浆:称取100~200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等,PBS或生理盐水冲洗,洗净血水,滤纸吸干,用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL预冷的Lysis Buffer,再加入50ul Reagent A , 0冰浴中上下研磨组织20次;有未研磨开的组织,可用双层纱布过滤。

b. 培养细胞匀浆:消化细胞,PBS洗涤,800 × g 5~10 min离心收集细胞。计数。每次提取需要5 × 107个细胞,加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞,再加入50ul Reagent A将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内,0冰浴研磨细胞20~30次。

2. 将组织或细胞匀浆物转移到1.5ml离心管中,4700× g 离心5 min。细胞核沉淀在收集管底部。加入0.5 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬沉淀;

3. 取另一新离心管内加入0.5 mL Medium Buffer,汲取上一步的重悬液,沿管壁小心地加入到此离心管中,置于Medium Buffer之上,4, 700 × g 离心5min。将上清转移到新离心管,细胞核沉淀在管底;

5. 弃上清,在细胞核沉淀中加入0.5 mL Lysis Buffer重悬细胞核沉,1000 × g 离心10min ,弃上清,得较纯的细胞核沉淀;

6. 50-100μL Store Buffer 或合适的反应缓冲液重悬细胞核沉淀,马上使用或-70保存。

四 注意事项:
1. 为保证获得完整的细胞核,*是全程低温操作。第二是快速。第三,在不破坏亚细胞器的情况下破碎细胞是制备细胞核的zui关键环节。与组织块相比,培养细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁,因而要选用小容量玻璃匀浆器、间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。
2. 以离心力g计算正确的离心速度,不同的离心机可据此精确计算离心速度。
3. 进行Western Blot2D-胶电泳,可直接加入上样缓冲液裂解细胞核。

五 储存:四周内使用可4℃储存,长期置-20

转速与离心力换算

G1.11×(10-5)×R×[rpm]
G为离心力,一般以g(重力加速度)的倍数来表示;

 [rpm] 2即:转速的平方; R为半径,单位为厘米。



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