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细菌基因组DNA提取试剂盒

细菌基因组DNA提取试剂盒

简要描述:货  号:D0021
名  称:细菌基因组DNA提取试剂盒
规  格:50T/200T
价  格:360.00/1180.00

产品型号:

所属分类:其他自产即用试剂

更新时间:2016-12-21

厂商性质:经销商

详情先容

细菌基因组DNA提取试剂盒

 

试剂盒组成

50T

200T

保存温度

RNaseA10mg/ml

500ul

2ml

-20

蛋白酶K10mg/ml

500ul

2ml

-20

溶菌酶

0.5g

2g

2-8

裂解液

12ml

50ml

RT

TE缓冲液

10ml

30ml

RT

 

原理概况
独特的裂解缓冲液加上蛋白酶K等迅速去掉除DNA外的其他物质,将DNA提取出来,得到的DNA可用于PCR/Real time-PCRsequencingSouthern blotmutant analysisSNP 等下游应用实验。

注意事项
1.裂解液低温时可能出现析出和沉淀,可以在热水中温浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
3. 
RNaseA经常使用可放28度保存,蛋白酶K请放-20度保存。

操作步骤
1.取100300ul培养的细菌(如果细菌浓度很高,请减少细胞用量),12,000rpm,离心2分钟,尽可能的吸净上清。如果细菌为革兰氏阳性菌,请用溶菌酶处理,处理方法:称取100mg溶菌酶,加入1ml 双蒸水,溶解后,分装成100ul/支,冻存,用时取出一支,直接加入*步收集的菌液中,重悬菌液,37度处理半小时,离心,去上清。如果为阴性菌,可跳过此步。
2. 加入200ul裂解液,马上震荡混匀,可选做步骤:如需要去除RNA,可以加入10μl RNase A(10mg/ml)溶液,振荡混匀,室温放置5-10分钟。
3.加入10μl蛋白酶K(10mg/ml)溶液,颠倒混匀,65放置1030分钟,期间颠倒35次,小心内心管盖受热开启。
4.在上清中加入三倍体积无水乙醇,充分混匀。
512000rpm离心5min,弃上清,沉淀加入1ml 70%乙醇,轻轻混匀,再次12000rpm离心5min,弃上清,将离心管在离心机中再次离心30S左右,吸去底部少量液体。
7.室温放置2min左右,等沉淀边缘微微发白,加入50100ulTE缓冲液溶解,如很难溶解,可55水浴5分钟。
8.电泳或者其他方法检测,进入下游实验。



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