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RIPA裂解液(强) BL504A

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RIPA裂解液(强) BL504A
产品编号:BL504A
产品规格:100ml
产品品牌:Biosharp
产品价格:270.00

产品型号:

联系方式

86-021-65672052

产品先容

RIPA裂解液(强) BL504A 现货

RIPA 裂解液(强) 产品编号 产品名称 规格 BL504A RIPA 裂解液(强) 100 ml 产品概况: 该 RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA 裂解液 裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 Western、IP 等。 RIPA 的本意是 Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA 裂解液的配方有很多种,根 据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。 RIPA 裂解液(强)的主要成分为 50mM Tris (pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100, 1% sodium deoxycholate,0.1% SDS,以及 sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA, leupeptin 等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。 用 RIPA 裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。 由于含有较高浓度的去垢剂,不能用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。 别名:RIPA Lysis Buffer 使用说明: 对于培养细胞样品: 1、融解 RIPA 裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF,使 PMSF 的zui终浓度为 1 mM。 2、对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中 的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。 用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2 秒后,细胞就会被裂解。 对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有 明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管,然后再裂解。 3、充分裂解后,10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。 裂解液用量说明:通常 6 孔板每孔细胞加入 150 微升裂解液已经足够,但如果细胞密度 非常高可以适当加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。 对于组织样品: 1、把组织剪切成细小的碎片。 2、融解 RIPA 裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF,使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。

3、按照每 20 毫克组织加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分 可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。) 4、用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。 5、充分裂解后,10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。 6、如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈 vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必 使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。 注:RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶 状物为含有基因组 DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下, 可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通 过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转 录因子,例如 NF-kappaB、p53 等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。 注意事项: 1、为取得zui佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。 2、需自备 PMSF。 3、裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。 4、关于裂解液,也需要通过一些预实验来摸索zui佳的适合您实验条件的裂解液。 5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 保存条件: -20℃保存,一年有效。

RIPA裂解液(强) BL504A 现货

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